若细胞密度达80%90%，可进行传代培养使用不含钙镁离子的PBS润洗细胞后，加入胰蛋白酶EDTA消化消化后终止反应，离心收集细胞，用完全培养基重悬后按12的比例分到新培养瓶中细胞冻存收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用按照细胞传代的过程收集消化好的细胞，用配制好的；如人胚成纤维细胞在体外培养时只能增殖6070代 细胞增殖次数与端粒DNA长度有关Harley等1991发现体细胞染色体的端粒DNA会随细胞分裂次数增加而不断缩短细胞DNA每复制一次端粒就缩短一段，当缩短到一定程度至Hayflick点时，可能会启动DNA损伤检测点DNA damage checkpoint，激活p53，引起p21表达参见第十三章第四节。

细胞来源与特性HFL1细胞源自白人胎儿的肺组织，经过精心培育，该细胞系具有稳定的核型，可在46代左右稳定传代其形态呈典型的成纤维样，贴壁生长细胞数量与储存每瓶HFL1细胞含量超过1x10^6，便于科研人员使用细胞可采用T25瓶或1mL冻存管进行储存和运输，其中1mL冻存管中的细胞需在80度冰箱过夜；在细胞中积累导致自由基增高第二端粒缩短致衰老的假说，该假说认为衰老是由于端粒的不断缩短引起来的，最直接的证据是人胚肺成纤维细胞连续培养50代后不再分裂，出现复制性衰老，检测不同代数的细胞可以观察到端粒是明显缩短的，但端粒长度的变化还受到营养摄入社会经济地位心理压力等因素的影响。

人胚成纤维细胞可以培养多少代细胞

衰老，乃是指机体各器官功能普遍的逐渐降低的过程衰老有两种不同的情况，一种是正常情况下出现的生理性衰老另一种是疾病引起的病理性衰老是一种自然规律但是，当人们采用良好的生活习惯和保健措施，就可以有效地延缓衰老，提高生活质量。

体内的干细胞虽然保持着不断分裂的能力，但随着个体的年龄增长，细胞的增殖能力不断下降例如，从人胚中取出的成纤维细胞进行培养时，可持续分裂60~80次从一位40岁的成年人体取出的成纤维细胞，则只能分裂40次如果从一位80岁的老人体内取出成纤维细胞，则分裂30次后即停止分裂因此，人细胞的最。

第二体内有害物质蓄积会引起衰老 人体中可蓄积许多外来的与内部生的有害物质，该类物质可以引起代谢絮乱，使各系统生理功能失常，以致细胞衰老与死亡，目前最引人注意的物质是自由基及其引起的脂褐素1自由基增多 自由基是机体代谢过程中不断生产的能损害自身的毒物产物，对体内蛋白质脂类糖类与各种酶都有损害作用正常情况下。

1由于乌龟新陈代谢缓慢，它具备一种特殊功能，就是将生理节奏放慢，进入类似冬眠的假死状态，这样的状态可以暂缓细胞的代谢2乌龟的细胞分化缓慢，繁殖代的次数多，它的成纤维细胞体外培养可达到125代，而人类成纤维细胞一般只能达到50代，乌龟是人的两倍半，通常动物的成纤维细胞繁殖代数与动物寿命成。

每个人都有衰老的一天，如果提前做好规划，老的时候，才不会手足无措，老了才活得舒畅，真的有一天不能动了，也不会陷入绝望01 其实人的一辈子不过几十年，一晃就过去了，从工作到退休最多40年，在工作的这些年该赚钱赚钱，该休息休息，把自己的身体搞垮了，到时上有老，下有小，自己身体也不。

二倍体是指体细胞中有2个染色体组再简洁点说每条染色体都有一条和它一样的染色体这样的2条一样的染色体叫做一对同源染色体人体细胞有23对这样的同源染色体，所以是二倍体在双套生物中，有一个过程，将双倍体的细胞分裂成单倍体，使配子结合后的合子为双倍体，称为减数分裂有些生物以倍性。

人胚成纤维细胞的体外培养分裂次数

第二，科学家研究发现，在人和动物的细胞中，有一种关于细胞分裂的时钟，它限制了细胞繁殖的代次及其生存的年限人的胚肺纤维细胞，在体外培养到50代时，就再难以往下延续了，而乌龟可以达到110代，这说明，龟细胞繁殖代数的多少，同龟的寿命长短有密切的关系 第三，动物学家和医学家检查了龟类的。

海弗里克发现，即使在最合适的培养条件下，成纤维细胞也无法无限增殖下去，而是大概分裂了50代后就停止现在研究证实，每种动物都有他自己的“极限”，如海龟为九十至一百二十五次，可活到一百七十五年细胞的培养代数越多，动物的寿命就越长，反之则短在现代老年学中，海弗 里克极限已称为一条基本。

当细胞密度达到80%90%时，进行传代培养四细胞传代 传代比例建议按1214的比例进行传代传代步骤弃去旧培养基，用PBS清洗细胞12次加入适量的胰酶消化液，消化至细胞变圆脱落加入新鲜培养基终止消化，用吸管轻轻吹打细胞，使其分散成单个细胞悬液根据传代比例，将细胞悬液分至新。

20世纪初，路比勒提出代谢率和个体大小与寿命之间存在相关性，认为较大的哺乳动物代谢率较低，寿命较长另一位学者弗里德洛尔则认为，脑部的发育与寿命密切相关，哺乳动物头部系数越大，寿命越长，人类的头部系数约为07，因此寿命可以达到100年左右20世纪60年代的实验发现，人的成纤维细胞在体外培养时。

3 20世纪60年代的实验发现，人的成纤维细胞在体外培养时大约能分裂50次，之后细胞开始衰老并死亡这一分裂次数，即传代次数，与生物个体的寿命相关来自长寿个体的细胞在体外培养时传代次数通常更多一般而言，人体细胞的传代次数在40到60次之间，据此推算，人的最高寿命可能达到110岁4 综上所述。